超微量分光光度计原理是我们从事实验室仪器研究和应用的人员需要掌握的知识。分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。该仪器是实验室、科研机构、医疗、农业、食品厂、饮用水厂等机构*检验设备。已经成为现代分子生物实验室常规仪器。数字分光光度计常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计基本原理是指采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比。
超微量分光光度计,就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量,相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同,因此,每种物质就有其*的、固定的吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。
1、温度和湿度是影响仪器性能的重要因素:他们可以引起机械部件的锈蚀,使金属镜面的光洁度下降,引起仪器机械部分的误差或性能下降;造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀,产生光能不足、杂散光、噪声等,甚至仪器停止工作,从而影响仪器寿命。维护保养时应定期加以校正。使用紫外分光光度计应具备四季恒湿的仪器室,配置恒温设备,特别是地处南方地区的实验室。
2、环境中的尘埃和腐蚀性气体亦可以影响机械系统的灵活性、降低各种限位开关、按键、光电偶合器的可靠性,也是造成必须学部件铝膜锈蚀的原因之一:因此,使用紫外分光光度计必须定期清洁,保障环境和仪器室内卫生条件,防尘。
3、比例双光束紫外分光光度计使用一定周期后,内部会积累一定量的尘埃,由维修工程师或在工程师指导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘工作:同时,将各发热元件的散热器重新紧固,对光学盒的密封窗口进行清洁,必要时对光路进行校准,对机械部分进行清洁和必要的润滑。zui后,恢复原状,再进行一些必要的检测、调校与记录。分析仪器工作者要懂得仪器的日常维护和对主要技术指标的简易测试方法,自己经常对仪器进行维护和测试,以保证仪器工作在*状态。
超微量分光光度计是精密仪器,正确安装、使用及保养对保持仪器良好的性能和保证测试的准确度具有重要作用。为了保证测试结果的准确性及可靠性,新制造、使用中和修理后的分光光度计都应定期进行检定。检定不合格的仪器还要进行及时调整。除此之外,分光光度计的操作步骤都有啥?为了解决使用者的疑惑,更好的保护分光光度计与实验结果的准确性,本次特别介绍分光光度计,供参考!
超微量分光光度计的检验小妙招
1.波长准确度的检验:
分光光度计在使用过程中,由于机械振动、温度变化、灯丝变形、灯座松动或更换灯泡等原因,经常会出现刻度盘上的读数与实际通过溶液的波长不符合的现象,
因而导致仪器灵明度降低,影响测定结果的精度,需要进行检验。
检验波长准确度zui简单的方法是用干涉滤光片或镨钕滤光片测量仪器的吸收峰值, 如果测出的值与滤光片标准值之差超出规程规定, 则需要进行波长调节。
2.透射比正确度的检验:
用透射比标准值分别为10 %、20 %、30 %左右的光谱中性滤光片,可见光区分别在440、546、635nm波长处,以空气为参比,分别测量各滤光片的透射比,紫外光区用重铬酸钾溶液分别在235、257、313、350nm波长处,以高氯酸溶液为参比,测量其透射比。
3.稳定度的检验:
在零点不受光的条件下,用零点调节器将仪器调至零点,观察3分钟读取透射比的变化,即为零点稳定性。在仪器测量范围两端向中间靠10nm处,调节零点后,盖上样品室盖(打开光门),使光电管受光,调节透射比为95%(数显仪器调至)察3分钟读取透射比的变化,为光电流稳定性。
4.光的检验:
双光束分光光度计棱镜式仪器在420nm处,光栅式仪器在360nm处,紫外分光计在220nm处分别用符合规定的截止滤光片,以空气为参比,测量其透射比值,即为仪器在相应波长下的杂散辐射率。