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数字分光光度计详细情况介绍说明
发布时间:2018-03-23 点击次数:992次
   数字分光光度计原理是我们从事实验室仪器研究和应用的人员需要掌握的知识。分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。该仪器是实验室、科研机构、医疗、农业、食品厂、饮用水厂等机构必备检验设备。已经成为现代分子生物实验室常规仪器。数字分光光度计常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计基本原理是指采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比。
  数字分光光度计详细情况如下:
  组成部分一:电光系统。在该系统中主要是由钨灯和相应的电源组成,这种系统对整体的稳定性就有很大影响,当该系统不能正常工作后也会导致仪器工作不稳定。
  组成部分二:光学系统。这种系统包括有外光路系统和单色器2个主要部分,其中外光路和单色器都有很多类型,单色器就是紫外可见分光光度计散光的主要来源。
  组成部分三:光电系统。该系统是紫外可见分光光度计zui关键的部件,系统会直接影响到仪器中的灵敏度和适用范围,里面有光电倍增管、光电管、二极阵列和硅光电池等。
  组成部分四:电子系统。在该系统中主要有放大器和A/D变换器等组成,其中放大器就是影响整机灵敏度和稳定性的主要相关部件。
  组成部分五:输出打印系统和数据处理系统。该系统是决定整机自动化程度的关键部件,能够直接影响紫外可见分光光度计的质量。
  物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应用标准品或对照品同时操作。
  数字分光光度计原理说明的这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质,一般要消除320nm的“背景”信息,设定此功能“开”。与测试核酸类似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,zui佳的线性范围在1.0-1.5之间。实验中选择Warburg公式显示样品浓度时,发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上,只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%,表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg公式吸光值换算成浓度,乘以一定的系数,只要吸光值有少许改变,浓度就会被放大,从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。
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