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实验室分光光度计测量条件的选择参照两个方面
发布时间:2020-08-27 点击次数:139次
   实验室分光光度计是实验室检测核酸或者蛋白样品浓度常用的工具之一。仪器使用频繁,但甚少见到有人维护。其实,保持分光光度计清洁、无污染是成功操作的关键。适合从紫外光区到可见光区的测定,支持单机、联机2种模式,单机状态下使用机内微机系统提供荧光强度测量、浓度直读、自动调零、自动扣除背景等功能,联机状态可通过USB2.0接口使用上层软件对仪器进行控制和数据采集分析。
 
  实验室分光光度计测量条件的选择:
  测试波长的选择
  当用分光光度计对溶液进行测定时,首先需要选择合适的测量波长。选择的依据是该被测溶液的吸收曲线。在一般情况下,总是选择较大吸收波长作为测量波长,这样可以提高灵敏度。
 
  而在有些情况下较大吸收峰很尖锐、吸收过大或附近有干扰存在,就不能选较大吸收波长,而须在保证有一定灵敏度的情况下,选择吸收曲线中的其它波长进行测定(曲线较平坦处对应的波长),以消除干扰。绘制吸收曲线是正确选择波长的有效手段和方法。
 
  参比溶液和溶荆的选择
  分光光度计的测量实际上是以通过参比池的光强度作为人射光强度来测定试样的吸光度,先调节仪器使透过参比池溶液的吸光度为零,然后让同一束光通过样品,使得吸光度比较真实地反映待测物质的浓度,所以参比溶液的选择非常重要。
 
  如果仅有待测物质与显色剂的反应产物有吸收,可用纯溶剂或蒸馏水作参比溶液。如果显色剂有颜色,并在测定波长下有吸收,则用显色剂溶液作参比溶液,所加人显色剂及其它试剂的量,与试样中的加入量应一致。
 
  如果样品中其它组分本身的颜色对测定有干扰,而所用显色剂没颜色,则用不加显色剂的样品溶液作参比液。
 
  正确选择合适的溶剂,对提高分析的准确度起重要作用。为减小溶剂中杂质的影响,应选择高纯度的溶剂;溶剂应不与待测物质发生化学反应;待测物在溶剂中要有一定的溶解度;在测定的波长范围内,溶剂本身没有吸收,注意常用溶剂的较短可用波长;当用挥发性大的溶剂时,测量过程中吸收池应加盖。
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